研究のためのフローサイトメトリー

Ⅳ. 直接免疫蛍光法(ヒト細胞浮遊液)

2.抗体染色

サンプル処理 1~10カラー解析(FITC/PE/ECD/PC5/PC7/APC/APC A700/APC A750/PB/KO)

1. 準備 1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管(12×75mm)を測定項目数+1本用意し、1本にコントロール、残りに抗体名をラベルします。
2.抗体の添加 2.抗体の添加*1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量*1加えます。コントロールの試験管には、調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます。
3. 検体の添加 3. 検体の添加
分離単核球サンプル(1×107/mL)を100μL加えます。
4. インキュベーション 4. インキュベーション
4℃で、暗所30~45分インキュベーションします。
5. 洗浄 5. 洗浄
PBSを2mL加え、 よく攪拌します。
400~450×g、5分間遠心し、上清を除去します。
もう1回、繰り返します。
6. 測定 6. 測定
PBS 500μLに再浮遊後、測定まで冷暗所に保存し、なるべく速やかにフローサイトメーターで測定してください。 すぐに測定できない場合は、0.5%パラホルムアルデヒドPBS 500μLに再浮遊し、24時間以内に測定してください。
  • 1テストあたりの抗体規定量
    COULTER CLONE:使用前に5μLに血清加 PBS195μLの割合で希釈し、200μLご使用ください。
    IOTest:20μLまたは10μL