Ⅳ. 直接免疫蛍光法(ヒト細胞浮遊液)
サンプル処理 1~10カラー解析(FITC/PE/ECD/PC5/PC7/APC/APC A700/APC A750/PB/KO)
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1. 準備 測定する患者検体ごとに試験管(12×75mm)を測定項目数+1本用意し、1本にコントロール、残りに抗体名をラベルします。 |
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2.抗体の添加*1 抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量*1加えます。コントロールの試験管には、調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます。 |
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3. 検体の添加 分離単核球サンプル(1×107/mL)を100μL加えます。 |
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4. インキュベーション 4℃で、暗所30~45分インキュベーションします。 |
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5. 洗浄 PBSを2mL加え、 よく攪拌します。 400~450×g、5分間遠心し、上清を除去します。 もう1回、繰り返します。 |
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6. 測定 PBS 500μLに再浮遊後、測定まで冷暗所に保存し、なるべく速やかにフローサイトメーターで測定してください。 すぐに測定できない場合は、0.5%パラホルムアルデヒドPBS 500μLに再浮遊し、24時間以内に測定してください。 |