Ⅳ. 直接免疫蛍光法（ヒト細胞浮遊液）

2．抗体染色

サンプル処理　1～10カラー解析（FITC／PE／ECD／PC5／PC7／APC／APC A700／APC A750／PB／KO）

	1. 準備測定する患者検体ごとに試験管（12×75mm）を測定項目数＋1本用意し､1本にコントロール､残りに抗体名をラベルします｡
	2.抗体の添加^＊1 抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量^＊1加えます｡コントロールの試験管には､調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます｡
	3. 検体の添加分離単核球サンプル（1×10⁷／mL）を100μL加えます｡
	4. インキュベーション 4℃で､暗所30～45分インキュベーションします｡
	5. 洗浄 PBSを2mL加え､よく攪拌します｡ 400～450×g､5分間遠心し､上清を除去します｡もう1回､繰り返します｡
	6. 測定 PBS 500μLに再浮遊後､測定まで冷暗所に保存し､なるべく速やかにフローサイトメーターで測定してください｡すぐに測定できない場合は､0.5％パラホルムアルデヒドPBS 500μLに再浮遊し､24時間以内に測定してください｡

1テストあたりの抗体規定量
COULTER CLONE:使用前に5μLに血清加 PBS195μLの割合で希釈し､200μLご使用ください｡
IOTest:20μLまたは10μL
＊必要に応じて、抗体使用濃度検討を行う場合は、規定量をもとにガイドライン（Cytometry B Clin Cytom. 2013 Sep-Oct;84(5):291-308）に従ってください。