Ⅲ. 直接免疫蛍光法 (ヒト全血)
(1)TQ-Prep変法(Wash)
サンプル処理 1~10カラー解析(FITC/PE/ECD/PC5/PC7/APC/APC A700/APC A750/PB/KO)
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1. 準備 測定する患者検体ごとに試験管(12×75mm)を測定項目数+1本用意し、1本にコントロール、残りに抗体名をラベルします。 |
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2.抗体の添加*1 抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量*1加えます。コントロールの試験管には、調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます。 |
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3. 検体の添加*2 全血100μL*2を加え、よく攪拌します。 試験管の壁に血液が付着しないよう注意してください。 もし、付着した場合は、濡らした綿棒で拭き取ってください(溶血不良の原因になります)。 |
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4. インキュベーション 室温(20~25℃)、暗所で15~30分インキュベーションします。 |
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5. 溶血*3 検体をカルーセルにセットします。TQ-Prepにカルーセルをセットし、 ![]() |
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6. 洗浄 PBSを2mL加え、 よく攪拌します。 400~450×g、5分間遠心し、上清を除去します。 ※ 遠心・洗浄のポイント! |
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7. 測定 PBS 500μLに再浮遊後、測定まで2~8℃で遮光保存し、なるべく速やかにフローサイトメーターにて測定してください。 すぐに測定できない場合は、0.5%パラホルムアルデヒドPBS 500μLに再浮遊し、24時間以内に測定してください。 |