研究のためのフローサイトメトリー

Ⅲ. 直接免疫蛍光法 (ヒト全血)

1.No-wash

(2)OptiLyse B  -B.D.社フローサイトメーター用溶血試薬(No-wash)

サンプル処理 1~5カラー解析(FITC/PE/ECD/PC5/PC7)

1. 準備 1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管(12×75mm)を測定項目数+1本用意し、1本にコントロール、残りに抗体名をラベルします。
2.抗体の添加 2.抗体の添加*1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量*1加えます。コントロールの試験管には、調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます。
3. 検体の添加 3. 検体の添加*2
ヒト全血100μL*2を加え、よく攪拌します。
4. インキュベーション 4. インキュベーション
室温(20~25℃)、暗所で10~15分インキュベーションします。
5. 溶血剤の添加 5. 溶血剤の添加
OptiLyse Bを100μL加え、 よく攪拌します。
6. インキュベーション 6. インキュベーション
室温(20~25℃)、暗所で10分インキュベーションします。
7. 蒸留水の添加 7. 蒸留水の添加
蒸留水を1mL加え、 よく攪拌します。
8. インキュベーション 8. インキュベーション
室温(20~25℃)、暗所で10分インキュベーションします。
9. 洗浄 9. 洗浄
そのまま、測定します。
溶血終了後は、測定まで2~8℃で遮光保存してください。
24時間以内に測定してください。
  • 1テストあたりの抗体規定量
    CYTO-STAT:10μL
    OptiClone:20μL
  • 白血球数が3~10×103/mm3である検体を用いてください。
    検体の白血球数の調整は、『Ⅱ.試薬・材料および検体』の①ヒト全血の項( 2.検体 )をご参照ください。