研究のためのフローサイトメトリー

Ⅲ. 直接免疫蛍光法 （ヒト全血）

1．No-wash

（2）OptiLyse B  -B.D.社フローサイトメーター用溶血試薬（No-wash）

サンプル処理　1～5カラー解析（FITC／PE／ECD／PC5／PC7）

1. 準備 1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管（12×75mm）を測定項目数＋1本用意し､1本にコントロール､残りに抗体名をラベルします｡
2.抗体の添加 2.抗体の添加＊1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量＊1加えます｡コントロールの試験管には､調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます｡
3. 検体の添加 3. 検体の添加＊2
ヒト全血100μL＊2を加え､よく攪拌します｡
4. インキュベーション 4. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10～15分インキュベーションします｡
5. 溶血剤の添加 5. 溶血剤の添加
OptiLyse Bを100μL加え､ よく攪拌します｡
6. インキュベーション 6. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10分インキュベーションします｡
7. 蒸留水の添加 7. 蒸留水の添加
蒸留水を1mL加え､ よく攪拌します｡
8. インキュベーション 8. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10分インキュベーションします｡
9. 洗浄 9. 洗浄
そのまま､測定します｡
溶血終了後は､測定まで2～8℃で遮光保存してください｡
24時間以内に測定してください｡
  • 1テストあたりの抗体規定量
    CYTO-STAT:10μL
    OptiClone:20μL
  • 白血球数が3～10×103／mm3である検体を用いてください｡
    検体の白血球数の調整は､『Ⅱ.試薬･材料および検体』の①ヒト全血の項( 2．検体 )をご参照ください｡