研究のためのフローサイトメトリー

Ⅲ. 直接免疫蛍光法 (ヒト全血)

1.No-wash

(1)TQ-Prep(No-wash)サンプル処理 1~5カラー解析(FITC/PE/ECD/PC5/PC7)

  1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管(12×75mm)を測定項目数+1本用意し、1本にコントロール、残りに抗体名をラベルします。
  2.抗体の添加*1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量*1加えます。コントロールの試験管には、調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます。
  3. 検体の添加*2
ヒト全血100μL*2を加え、よく攪拌します。
試験管の壁に血液が付着しないよう注意してください。
もし、付着した場合は、濡らした綿棒で拭き取ってください(溶血不良の原因になります)。
  4. インキュベーション
室温(20~25)、暗所で10~15分インキュベーションします。
  5. 溶血*3
検体をカルーセルにセットします。
TQ-Prepにカルーセルをセットし、 四角い右方向を向いた のボタンを押します。
  6. 測定
そのまま、測定します。
溶血終了後、測定まで2時間以上放置する場合は、2~8℃で遮光保存してください。
24時間以内に測定してください。
  • 1テストあたりの抗体規定量
    CYTO-STAT:10μL
    OptiClone:20μL
  • 白血球数が3~10×103/mm3である検体を用いてください。
    検体の白血球数の調整は、『Ⅱ.試薬・材料および検体』の①ヒト全血の項( 2.検体 )をご参照ください。
  • TQ-Prepの詳しい操作は、マニュアルをご参照ください。
    B/D社のフローサイトメーターをご使用の場合は、スクリーンの試薬モードを切り替えてください。または、溶血終了後、蒸留水を500μL添加してください。詳細はイムノプレップ溶血試薬の製品能書をご参照ください。