Ⅰ. 各種溶血手順フローチャート(ヒト全血)
2. Wash(1)
注1)いずれの抗体のタイプでも使用できます
注2)イムノプレップ及びOptiLyseB、 Cによる溶血では、いずれも細胞の固定が行われます。
注3)VersaLyse 溶血試薬による溶血で溶血固定を同時に行う場合は、別途 IOTest 3 固定試薬を
ご用意ください。
イムノプレップ& TQ-Prep 変法 (Wash) |
全血ライジング キット |
OptiLyse B (Wash) |
OptiLyse C (Wash) |
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抗体の反応 | 抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
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室温15~30分 | 室温15~30分 | 室温15~30分 | 室温15~30分 | |
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洗浄 | PBS 2~3mL添加 400×g、5分 |
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溶血 | TQ-Prepにて 溶血、固定処理 |
1mL(原液を25倍希釈) | 溶血剤 100μL | 溶血剤 500μL |
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30秒~2分室温放置 | 10分室温放置 | 10分室温放置 | ||
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反応停止 | フィクサティブ250μL | 蒸留水 1mL (10分放置) |
PBS 500μL (15分放置) |
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PBSで洗浄 | PBS 2mL | |||
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400~450×g、5分 | ||||
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PBSで洗浄 | PBS 2mL | PBS 2mL | PBS 2mL | PBS 2mL |
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400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | |
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再浮遊 | PBS 500μL | PBS 500μL | PBS 500μL | PBS 500μL |
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測定 | 2~8℃で保存 (24時間以内)* |
2~8℃で保存 (24時間以内)* |
2~8℃で保存 (24時間以内)* |
2~8℃で保存 (24時間以内)* |
(保存時間) |
*10倍希釈 IOtest 3 固定試薬または0.5%パラホルムアルデヒド溶液に再浮遊した場合。
IOTest 3 固定試薬(製造番号A07800)は8%ホルムアルデヒド溶液です。使用時に10~20倍希釈してご使用ください。
2. Wash(2)
注1)いずれの抗体のタイプでも使用できます
注2)イムノプレップ及びOptiLyseによる溶血では、いずれも細胞の固定が行われます。
注3)VersaLyse 溶血試薬による溶血で溶血固定を同時に行う場合は、別途IOTest 3 固定試薬を
ご用意ください。
VersaLyse 溶血試薬 | IOTest溶血試薬(塩化アンモニウム溶血試薬) | |||
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固定なし | 固定あり | 固定なし | 固定あり | |
抗体の反応 | 抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
抗体規定量 + ヒト全血100μL |
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室温15~30分 | 室温15~30分 | 室温15~30分 | 室温15~30分 | |
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溶血 | 溶血剤1mL | 溶血固定液注3)1mL (VersaLyse:IOTest 3 固定試薬 =1mL:25μL) |
溶血剤 2mL | 溶血剤 2mL |
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10分室温放置 | 10分室温放置 | 10分室温放置 | 10分室温放置 | |
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PBSで洗浄 | PBS 2mL | PBS 2mL | PBS 2mL | PBS 2mL |
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400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | 400~450×g、5分 | |
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10倍希釈IOTest 3 固定 試薬500μL または 0.5%パラホルムアルデ ヒド加 PBS 500μL |
10倍希釈IOTest 3 固定 試薬500μL または 0.5%パラホルムアルデ ヒド加 PBS 500μL |
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再浮遊 | PBS 500μL | PBS 500μL | ||
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測定 | 2~8℃で保存 (1時間以内) |
2~8℃で保存 (24時間以内)* |
2~8℃で保存 (1時間以内) |
2~8℃で保存 (24時間以内)* |
(保存時間) |
*10倍希釈 IOtest 3 固定試薬または0.5%パラホルムアルデヒド溶液に再浮遊した場合。
IOTest 3 固定試薬(製造番号A07800)は8%ホルムアルデヒド溶液です。使用時に10~20倍希釈してご使用ください。