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■ 細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法
　
　 IV. 直接免疫蛍光法（ヒト細胞浮遊液） 　
　 　 　
　 2．抗体染色
サンプル処理　1〜5カラー解析（FITC／PE／ECD／PC5またはPE-Cy5／PC7またはPE-Cｙ7）
　
　 　　　　
　
1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管（12×75mm）を測定項目数＋1本用意し､1本にコントロール､残りに抗体名をラベルします｡
　
　
4. インキュベーション
4℃で､暗所30〜45分インキュベーションします｡
　　　　　
　
2.抗体の添加＊1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量＊1加えます｡コントロールの試験管には､調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます｡		　
　
5. 洗浄
PBSを2mL加え､ よく攪拌します｡
400〜450×g､5分間遠心し､上清を除去します｡
もう1回､繰り返します｡
　　　　　
　
3. 検体の添加
分離単核球サンプル（1×107／mL）を100μ（ミュー）L加えます｡		　
　
6. 測定
PBS 500μ（ミュー）Lに再浮遊後､測定まで冷暗所に保存し､なるべく速やかにフローサイトメーターで測定してください｡ すぐに測定できない場合は､0.5％パラホルムアルデヒドPBS 500μ（ミュー）Lに再浮遊し､24時間以内に測定してください｡
＊11テストあたりの抗体規定量
COULTER CLONE：使用前に5μ（ミュー）Lに血清加PBS195μ（ミュー）Lの割合で希釈し､200μ（ミュー）Lご使用ください｡
IOTest ：20μ（ミュー）Lまたは10μ（ミュー）L
　
　
　
　 　
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