細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法-3-1-2/サイトメトリー専門Web

■ 細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法

．直接免疫蛍光法（ヒト全血）

1．No-wash

サンプル処理　1～5カラー解析（FITC／PE／ECD／PC5またはPE-Cy5／PC7）

（2）　OptiLyse B -オーソ社、B.D.社フローサイトメーター用溶血試薬　（No-wash）

1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管（12×75mm）を測定項目数＋1本用意し､1本にコントロール､残りに抗体名をラベルします｡

6. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10分インキュベーションします｡

2.抗体の添加^＊1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量^＊1加えます｡コントロールの試験管には､調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます｡

7. 蒸留水の添加
蒸留水を1mL加え､よく攪拌します｡

3. 検体の添加^＊2
ヒト全血100

L＊2を加え､よく攪拌します｡

8. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10分インキュベーションします｡

4. インキュベーション
室温（20～25℃）､暗所で10～15分インキュベーションします｡

9. 洗浄
そのまま､測定します｡
溶血終了後は､測定まで2～8℃で遮光保存してください｡
24時間以内に測定してください｡

5. 溶血剤の添加
OptiLyse Bを100

L加え､よく攪拌します｡

＊1	1テストあたりの抗体規定量　CYTO-STAT:10L 　OptiClone:20L		＊2	白血球数が3～10×10³／mm³である検体を用いてください｡検体の白血球数の調整は､『.試薬･材料および検体』のヒト全血の項( 2．検体 )をご参照ください｡
			＊2