細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法-3-1/サイトメトリー専門Web

■ 細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法

．直接免疫蛍光法（ヒト全血）

1．No-wash

サンプル処理　1～5カラー解析（FITC／PE／ECD／PC5またはPE-Cy5／PC7またはPE-Cｙ7）

（1）　TQ-Prep（No-wash）

1. 準備
測定する患者検体ごとに試験管（12×75mm）を測定項目数＋1本用意し､1本にコントロール､残りに抗体名をラベルします｡

4. インキュベーション
室温（20～25）､暗所で10～15分インキュベーションします｡

2.抗体の添加^＊1
抗体名をラベルした試験管に各抗体を規定量^＊1加えます｡コントロールの試験管には､調べたい抗体に対応するアイソタイプコントロールを加えます｡

5. 溶血^＊3
検体をカルーセルにセットします｡
TQ-Prepにカルーセルをセットし､

のボタンを押します｡

3. 検体の添加^＊2
ヒト全血100

L^＊2を加え､よく攪拌します｡
試験管の壁に血液が付着しないよう注意してください｡
もし､付着した場合は､濡らした綿棒で拭き取ってください（溶血不良の原因になります）｡

6. 測定
そのまま､測定します｡
溶血終了後､測定まで2時間以上放置する場合は､2～8℃で遮光保存してください｡
24時間以内に測定してください｡

＊1	1テストあたりの抗体規定量　CYTO-STAT:10L 　OptiClone:20L		＊3	TQ-Prepの詳しい操作は､マニュアルをご参照ください｡ B／D社､オーソ社のフローサイトメーターをご使用の場合は､スクリーンの試薬モードを切り替えてください。または、溶血終了後、蒸留水を500L添加してください。
＊2	白血球数が3～10×10³／mm³である検体を用いてください｡検体の白血球数の調整は､『.試薬･材料および検体』のヒト全血の項( 2．検体 )をご参照ください｡		＊3