細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法-2-1/サイトメトリー専門Web

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■ 細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法

　

　

. 試薬・材料および検体

　

　

　

　

　

1．試薬・材料

PBS（リン酸緩衝液）

細胞洗浄、細胞再浮遊に用います。

　

a.

0.1％アジ化ナトリウム加PBS
（Ca^2＋､Mg^2＋不含）

　

-a.

アジ化ナトリウム（NaN3）不含PBS:市販Dulbecco's PBS（－）使用可

　

　

【調製法】

　

　

NaCl	8.0g
KCl	0.2g
Na₂HPO₄	1.15g
KH₂PO₄	0.2g
NaN₃	1g

これらを蒸留水1Lに溶解します｡

　

b.

血清加PBS

	-b.	COULTER CLONE抗体およびヒト骨髄サンプルの希釈に用います｡
		【調製法】
		-a に2％NBS（新生子ウシ血清）または0.1％BSA（ウシ血清アルブミン）を加えます｡

　

c.

5％パラホルムアルデヒド加PBS
ストック溶液

	-c.	【調製法】
		1. 5gパラホルムアルデヒドを1N NaOH 10mLに溶解します｡ 2. PBSを加えて80mLにします｡ 3. 4N HClでpH7.20.1になるように調整します｡ 4. PBSを加えて100mLにします｡

　

d.

0.5％パラホルムアルデヒド加
PBS溶液

	-d.	【調製法】
		-c をPBSで10倍希釈します｡

自己血漿または
正常ヒトAB型血漿

TQ-Prepで溶血するヒト全血検体の細胞濃度を調整する場合に用います｡

マウスIgG
またはヒト

グロブリン

非特異反応の起こりやすいサンプルの場合にブロッキング試薬として用います｡

リンパ球分離液
（Ficoll-paque:Pharmacia社等）

単核球を分離する場合に用います｡

　

試薬･材料および検体の2.検体

単核球分離サンプルを参照してください｡

溶血試薬

用途に合わせてお選びください。

　

a.

イムノプレップ
（製品番号7546999）

用手法

　

-a.

自動サンプル調製システム　ベックマン・コールター社TQ-Prep、Q-Prep用溶血試薬

　

b.

OptiLyse B
（製品番号IM1400）

用手法

　

-b.

オーソ社､B.D社フローサイトメーター用溶血試薬

　

c.

OptiLyse C
（製品番号A11894）

用手法

　

-c.

ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬

　

d.

全血ライジング･キット
（製品番号6603152）

用手法

	-d.	ベックマン・コールター社､オーソ社､B.D社フローサイトメーター用溶血試薬
		【調製法】
			イムノライズ 1容をPBS 24容で希釈します（25倍希釈､用時調製）｡ 1 検体当たり希釈液1mL用います｡

蒸留水

凍結乾燥製品の溶解およびOptiLyse Bによる溶血処理の際に用います｡

12×75mmサンプルチューブ

製品番号6199306または6199307

遠心機

　

Voltexミキサー

　

アスピレータ

　

マイクロピペッタおよびチップ

20

L以下用､20～200

L用､100～1000

L用

アイスバス

　

15mL遠沈管

　

　

　

　

　

　　　　　

　　

　　