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フローサイトメトリーアプリケーション
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細胞表面マーカーのサンプル調製法
■ 細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法
. 各種溶血手順フローチャート
2. Wash
注)いずれの抗体のタイプでも使用できます。
TQ-Prep
変法(Wash)
全血ランジング
キット
OptiLyse B
(Wash)
OptiLyse C
(Wash)
抗体の反応
抗体規定量
+
ヒト全血100
L
抗体規定量
+
ヒト全血100
L
抗体規定量
+
ヒト全血100
L
抗体規定量
+
ヒト全血100
L
室温30〜45分
室温30〜45分
室温30〜45分
室温30〜45分
洗浄
PBS 2〜3mL添加400×g、5分
溶血
TQ-Prep
にかける
1mL(原液を25倍希釈)
溶血剤 100
L
溶血剤 500
L
30秒〜2分室温放置
10分室温放置
10分室温放置
反応停止
フィクサティブ250
L
蒸留水 1mL(10分放置)
PBS 500
L(15分放置)
PBSで洗浄
PBS 2mL
PBS 2mL
400〜450×g、5分
400〜450×g、5分
PBSで洗浄
PBS 2mL
PBS 2mL
PBS 2mL
400〜450×g、5分
400〜450×g、5分
400〜450×g、5分
再浮遊
PBS 500
L
PBS 500
L
PBS 500
L
PBS 500
L
測定
2〜8℃で保存
(24時間以内)
*
2〜8℃で保存
(24時間以内)
*
2〜8℃で保存
(24時間以内)
*
2〜8℃で保存
(24時間以内)
*
(保存時間)
*
0.5%パラホルムアルデヒド溶液に再浮遊した場合