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Memo
HLA抗体は、臓器移植、造血幹細胞移植、血小板輸血不応答、輸血副作用（TRALI）などに関連して測定されています。従来はLCT法（リンパ球細胞毒性試験）あるいはAHG-LCT法（補体非依存性のHLA抗体も検出できる方法）が行われてきましたが、いずれも新鮮ヒトリンパ球を用いるためパネルの確保や細胞のViabilityの維持が難しく、操作も煩雑であるといった課題がありました。マイクロビーズを用いFCM法を測定原理としたことで、FlowPRA™は、簡便な操作で高感度かつ同一LOTでの検体処理が可能です。 |
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FlowPRA™ Screening Testの測定手順
30種類の異なるパネル抗原を結合したHLA Class Ⅰビーズ、同じく30種類の異なるパネル抗原を結合したHLA Class
Ⅱビーズ、および非特異的反応確認用のコントロールビーズの3種類（すべて580nm付近の蛍光を持つビーズ）を混和したものに、被検血清を反応させた後、2次抗体FITC標識抗ヒトIgG Fcγで染色し、HLA抗原と反応した血清中のIgGをFITC蛍光強度で検出します。
 
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Class
Ⅰビーズ（赤色表示）、ClassⅡビーズ（青色表示）、コントロールビーズ（水色表示）は、ほぼ同じ大きさを持ち、580nm付近の赤色の蛍光波長で、それぞれ異なった蛍光強度を持っています。前方散乱光と赤色蛍光で2パラメーターヒストグラムを作成し、各ビーズの集団にゲートを設定し、それぞれのゲート内のFITC蛍光（緑色蛍光）の陽性率を測定します（FlowPRAわずかな蛍光強度の変化を測定する必要があります。そのため、ネガティブコントロール用のビーズのピーク位置を100～101の間に設定するようにしてください）。 |
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ClassⅠ陽性コントロール血清を測定したデータ
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ClassⅠビーズにゲート |
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Controlビーズにゲート |
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点線白抜き： |
ClassⅠネガティブコントロール |
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実線赤色： |
ClassⅠ陽性コントロール血清（ClassⅠ陽性率99.4％） |
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点線白抜き： |
ClassⅠネガティブコントロール |
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実線水色： |
ClassⅠ陽性コントロール血清 |
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Controlビーズの位置が動かないことを確認します。 |
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| ClassⅡ陽性コントロール血清を測定したデータ |
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ClassⅡビーズにゲート |
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Controlビーズにゲート |
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点線白抜き： |
ClassⅡネガティブコントロール |
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実線青色： |
ClassⅡ陽性コントロール血清（ClassⅡ陽性率99.5％）
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点線白抜き： |
ClassⅡネガティブコントロール |
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実線水色： |
ClassⅡ陽性コントロール血清 |
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Controlビーズの位置が動かないことを確認します。 |
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検体測定データ例1
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ClassⅠビーズにゲート |
ClassⅡビーズにゲート |
Controlビーズにゲート |
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点線白抜き： |
ClassⅠネガティブ
コントロール |
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実線赤色： |
ClassⅠ検体1血清
（陽性率71.8％） |
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点線白抜き： |
ClassⅡネガティブ
コントロール |
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実線青色： |
ClassⅡ検体1血清
（陽性率 4.1％） |
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点線白抜き： |
ネガティブコントロール
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実線水色： |
検体1血清 |
Controlビーズの位置が動かないことを確認します。 |
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検体測定データ例2
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ClassⅠビーズにゲート |
ClassⅡビーズにゲート |
Controlビーズにゲート |
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点線白抜き： |
ClassⅠネガティブ
コントロール |
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実線赤色： |
ClassⅠ検体2血清
（陽性率80.9％％）
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点線白抜き： |
ClassⅡネガティブ
コントロール |
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実線青色： |
ClassⅡ検体2血清
（陽性率 26.8％）
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点線白抜き： |
ネガティブコントロール
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実線水色： |
検体2血清 |
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Controlビーズの位置が動かないことを確認します。
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